关键词：线粒体细胞色素b(Cytb);;PCR;;qRT-PCR;;动物源性食品
摘 要：近年来,食品安全是一个较为敏感的话题。以动物源性成分为主的食品安全问题尤为突出,肉类产品的掺假成为消费者关注的重点。由于掺假方式多种多样,仅依靠传统的鉴别方法很难检测出其中肉类成分来源。(1)本研究通过设计猪、牛、羊、鸡、鸭5种动物Cytb DNA特异性引物,克隆测序,扩增出的产物片段长度分别为211bp、100bp、160bp、126bp、110bp,分别与NCBI GenBank进行Blast比对分析,同源性均为100%,说明5种扩增片段即为目的序列。使用常规PCR证实5种引物的特异性和灵敏度,灵敏度分别为牛模板DNA浓度2.0ng/μL,即1.0%,猪、羊、鸡、鸭模板DNA浓度0.2ng/μL,即0.1%。5种引物可作为实时荧光PCR引物使用。常规PCR检测市售9种肉制品,结果显示羊肉卷、牛肉卷中,分别有猪源性成分或者鸭源性成分出现,不同品种的猪肉香肠中,分别有鸡源性成分或者鸭源性成分出现。(2)使用SYBRGreen Ⅱ qRT-PCR法,通过标准曲线的建立及引物特异性和灵敏度的检测,结果显示5种引物的特异性和灵敏度符合试验要求。灵敏度分别为牛模板DNA浓度0.2 ng/μ尔L,即0.1%,猪、羊、鸡、鸭模板DNA浓度0.02 ng/μL,即0.01%。对9种肉制品检测结果与常规PCR相一致,且进一步检测出常规PCR未检出的掺杂肉类成分。本研究建立的两种检测体系,实时荧光PCR法简化了常规PCR方法,能够检测出更低的模板DNA浓度,且检测结果准确性更高,在1 h左右即可完成肉制品的检测,便于检验实践中推广。
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