关键词：乳酸乳球菌;组成型表达;pEGF;p40;肠道健康
摘 要：猪表皮生长因子（pEGF）与三叶因子协同给药已被证明能有效促进猪的肠道增殖与修复。本研究旨在构建食品级重组乳酸乳球菌强组成型表达系统并将其用于融合表达pEGF以及对猪肠道有益生作用的鼠李糖乳杆菌衍生蛋白p40，以克服目前乳酸乳球菌重组表达中组成型表达量低的现状以及避免抗生素使用的问题，并初步探索一种更强效的猪肠道益生制剂。首先，通过金黄色葡萄球菌核酸酶报告系统，以常用乳酸乳球菌组成型启动子P32为对照，从乳酸乳球菌NZ9000组成型高表达蛋白质的启动子以及前人研究发现的乳酸乳球菌强组成型启动子中，可视化地筛选出乳酸乳球菌NZ9000的伸长因子Tu的启动子（P1）活性最强。进一步地，将pNZ8148的氯霉素抗性基因替换为乳链菌肽抗性基因，成功构建了具有良好的乳链菌肽耐受性且完全失去氯霉素抗性的食品级重组乳酸乳球菌强组成型表达系统NZ9000/pP1NR。同时，本研究利用该系统成功表达pEGF和融合蛋白pEGF-p40。细胞增殖试验结果显示，含有pEGF-p40的菌株培养上清更有效地促进猪小肠上皮细胞IPEC-J2的增殖。通过qRT-PCR检测了刺激后IPEC-J2细胞的SGLT-1、GLUT-2、SUC、EGFR和GLP2R，结果显示含有pEGF-p40的培养上清调节相关基因的表达情况不同于仅含有pEGF的培养上清。本研究构建了食品级重组乳酸乳球菌强组成型表达系统，成功表达了对猪肠道具有益生作用的pEGF-p40，为其他益生物质的安全生产提供借鉴，为开发一种强效的猪肠道益生制剂做了先行探究。
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