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大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706增殖及凋亡基因表达的影响分析
目的研究分析大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706的增殖及对凋亡基因表达的影响。方法不同浓度的大蒜素前药分为A1组(10μg/mL)、A2组(20μg/mL)、A3组(40μg/mL)、A4组(生理盐水,0μg/mL)共4组,分别作用于食管癌细胞Eca9706,在培养1、2、3 d后,用MTT比色法(噻唑蓝)检测细胞增殖情况,实时荧光定量(RT-PCR法)检测4组细胞p53基因在mRNA水平表达情况。结果大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706的增值抑制的最佳浓度为20μg/mL,最佳抑制时间为2 d,其对食管癌细胞Eca9706基因水平的抑制呈剂量依赖性。结论大蒜素前药可以有效抑制食管癌细胞Eca9706的增值,通过对凋亡相关基因的调控可以控制食管癌细胞增殖,从而达到消除肿瘤细胞的目的。
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姜黄醇与放疗联用对人乳腺癌MCF-7细胞的影响研究
目的研究天然中药提取物姜黄醇(turmeric alcohol)单独使用或者与放疗联用对MCF-7人乳腺癌细胞系/MCF-10A正常乳腺上皮细胞的生长抑制效果、肿瘤细胞克隆形成、细胞周期分布和端粒酶活性的影响。方法实验分4组,分别为:人乳腺癌细胞株MCF-7姜黄醇组;人乳腺癌细胞株MCF-7对照组;正常乳腺上皮细胞MCF-10A姜黄醇组;正常乳腺上皮细胞MCF-10A对照组。2组姜黄醇组分别使用姜黄醇处理,其余2组对照组不作处理。采用细胞增殖检测方法 CCK-8检测姜黄醇药物毒性;另外,分别单纯给予姜黄醇,或者姜黄醇与放疗联合,通过集落克隆形成实验(clone-forming assay)观察姜黄醇是否影响MCF-7细胞放射敏感性;以流式细胞仪检测各组乳腺癌细胞的细胞周期分布(细胞处于G1、S、G2的比率);在机制研究方面,测定肿瘤细胞端粒酶活性、端粒长度在给药前后的变化。结果姜黄醇对MCF-7乳腺癌细胞的生长具有显著的抑制作用,其抑制效果与时间和剂量相关,并在72h达到平台期;而采用姜黄醇后正常乳腺上皮细胞MCF-10A的增殖未受到明显影响。克隆形成能力方面,经过姜黄醇处理后即对MCF-7乳腺癌细胞的放射敏感性产生明显的影响,即合用姜黄醇可显著降低放疗后MCF-7细胞的集落形成率,计算姜黄醇的放射增敏比SERSF2为1.31,SERD0为1.32。而姜黄醇对MCF-10A正常乳腺上皮细胞的细胞周期分布未见明显影响。结论姜黄醇可以增加MCF-7人乳腺癌肿瘤细胞的放射敏感性,其放射增敏的机制可能与端粒酶活性下调、端粒缩短以及影响细胞周期分布有关。同时,姜黄醇对MCF-10A正常乳腺上皮细胞的细胞增殖、放射敏感性和细胞周期分布无明显影响。姜黄醇可能作为未来临床上可行的乳腺癌治疗放射增敏剂。
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细胞色素P4502E1在尼古丁致神经细胞氧化损伤中的作用
目的本文拟采用体外实验,探讨脑细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP 2E1)在尼古丁致神经细胞氧化损伤中的可能作用。方法实验选用IMR-32人神经母细胞瘤细胞系,设置对照组,尼古丁小剂量组(0.1 n M)、中剂量组(1 n M)和大剂量组(10 n M),并选用中剂量尼古丁加入不同剂量CYP2E1特异性抑制剂二丙烯基硫醚(diallyl sulfide,DAS)(0.025、0.05、0.075 n M)。尼古丁或尼古丁与二丙烯基硫醚处理细胞48 h。取处理后细胞,分别检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、CYP2E1mRNA和蛋白水平的变化,并对CYP2E1蛋白表达水平与LDH活力、SOD活力、ROS含量进行相关性分析。结果与对照组相比,经低、中、高剂量尼古丁处理后,IMR-32细胞增殖受抑制,抑制率分别为39%、47%、52%(均P<0.05);细胞受到损伤,培养基LDH活力分别升高14%、50%、70%(均P<0.05);SOD活力下降至对照组的76%、58%、44%(均P<0.05);细胞CYP2E1蛋白表达水平显著升高至2.19、2.65及2.76倍(均P<0.05),未见CYP2E1 mRNA水平改变;ROS生成量升高48%、65%、136%(均P<0.05)。与尼古丁(1 nm)组相比,加入低、中、高剂量抑制剂后,SOD活力升高24%、47%、52%(均P<0.05);ROS含量下降至77.8%、57.8%、44.3%(均P<0.05)。相关性分析显示,CYP2E1含量与LDH活力呈正相关,与SOD活力呈负相关,相关系数分别为0.740和-0.584,与ROS含量呈正相关,相关系数为0.695(均P<0.01)。结论尼古丁处理可抑制IMR-32细胞增殖,诱导脑CYP2E1表达,明显诱导ROS生成,致神经细胞损伤。
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干扰素-λ对肥大细胞Toll样受体表达和细胞因子分泌的调节作用的研究
目的探究干扰素-λ(interferon-λ,INF-λ)对肥大细胞Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达和细胞因子分泌的调节作用。方法采用干扰素-λ激发肥大细胞P815,收集激发后2、6、16 h不同时间点的细胞及其上清液。采用MTT方法检测不同时间点干扰素-λ对肥大细胞P815的细胞活力的影响;采用酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IL-4和IL-13的释放量;通过Western blot方法检测干扰素-λ对肥大细胞Toll样受体TLR2和TLR4蛋白表达的影响。结果 MTT实验结果表明,不同时间的干扰素-λ对肥大细胞P815的细胞活力均无显著性差异;ELISA结果表明,干扰素-λ能刺激肥大细胞P815释放IL-4和IL-13细胞因子,并且其释放量与空白对照组具有显著性差异(P<0.01);Western blot实验表明,与空白对照组相比,干扰素-λ激发肥大细胞P815后,不同时间点的给药组均可上调TLR2和TLR4蛋白的表达。当给药时间为16h时,其TLR2和TLR4蛋白的表达具有显著性上调(P<0.01)。结论干扰素-λ刺激肥大细胞P815释放IL-4和IL-13细胞因子可能是通过上调Toll样受体TLR2和TLR4蛋白的表达。
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不同浓度人参皂苷Rb1对成骨细胞增殖和分化的影响
目的观察人参皂苷Rb1对成骨细胞增殖、分化的影响。方法选取出生24 h之内的SD乳鼠10只,提取分离成骨细胞,并经细胞形态观察、碱性磷酸酶活性化学染色法以及Giemsa染色法鉴定。根据加入不同浓度的人参皂苷Rb1将成骨细胞分为0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L 5组;采用CCK-8法检测加药24、48、72 h后对成骨细胞增殖的影响;采用PNPP法检测成骨细胞中ALP活性,分析不同浓度的人参皂苷Rb1对成骨细胞分化的影响;Real-Time PCR法检测增殖标记基因PCNA、Ki67和分化标记基因COL1、BGP的表达水平。结果成功分离获得成骨细胞,经细胞形态学鉴定和染色结果显示细胞满足后续实验要求。CCK-8法检测结果显示:与0 mol/L组相比,人参皂苷Rb1不同浓度组对成骨细胞均有不同程度的促进增殖作用(P<0.05,P<0.001);碱性磷酸酶(ALP)比活性检测结果显示:与0 mol/L组相比,人参皂苷Rb1 10-7、10-6、10-5mol/L浓度组分别培养3、5、7 d后,及10-8mol/L培养7 d后,成骨细胞活性均有显著升高(P<0.05,P<0.001),最佳效果浓度组为10-6mol/L;Real-Time PCR法检测结果显示:与0 mol/L组相比,人参皂苷Rb1 10-7、10-6、10-5mol/L各浓度组均能显著提高成骨细胞PCNA、Ki67、BGP、COL1 mRNA表达水平,10-8mol/L可显著提高COL1mRNA表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.001),其中以10-6mol/L浓度组效果最佳。结论不同浓度(10-8、10-7、10-6、10-5mol/L)人参皂苷Rb1对成骨细胞增殖、分化具有明显促进作用。